Odabir endogene kontrole za imunoblot analizu proteina u sklerotičnim hipokampusima pacijenata sa epilepsijom temporalnog režnja

Abstract

Skleroza hipokampusa je najčešći neuropatološki nalaz kod epilepsije temporalnog režnja. Pored morfoloških promena odlikuju ga i promene nivoa različitih proteina u ćeliji. Imunoblot je nezamenjiva metoda za određivanje nivoa proteina i podrazumeva normalizaciju u odnosu na endogenu kontrolu (kontrolu jednakog nanošenja uzorka). Za tu svrhu se koriste proteini za koje se smatra da imaju stabilnu ekspresiju koja najmanje varira u ispitivanim uslovima, tretmanima i patofiziološkim stanjima. Ipak u nekim patofiziološkim stanjima se i ekspresija tradicionalno korišćenih endogenih kontrola menja, 1 što može dovesti do prikupljanja netačnih podataka i pogrešnog tumačenja rezultata. Cilj ovog rada je bio da se ispita stabilnost najčešće korišćenih endogenih kontrola i izabere najstabilnija koja će se koristiti za normalizaciju pri poređenju nivoa ciljnih proteina hipokampusa obolelih od epilepsije i neurološki intaktnih kontrola. Imunoblotom su detektovani β-aktin, α-tubulin, TATA-vezujući protein i gliceraldehid3-fosfat dehidrogenaza u tkivnim ekstraktima hipokampusa 9 pacijenata i 7 kontrola, i NormFinder softverom2 određene unutargrupna i međugrupna varijabilnost. Pokazano je da nivo strukturnih proteina β-aktina i α-tubulina najmanje varira u ispitivanim uslovima te se mogu koristiti za poređenje nivoa proteina u sklerotičnim i intaktnim hipokampusima. Rezultati upućuju da je odabir endogenih kontrola važan preduslov za dobijanje tačnih i pouzdanih podataka imunoblot metodom.