Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliensis – NOVI PATOGEN KROMPIRA U SRBIJI

Abstract

Fitopatogene bakterije iz roda Pectobacterium (raniji naziv Erwinia carotovora) na monokoti ledonim i dikotiledonim biljkama prouzrokuju bolesti tipa vlažne truleži. Osim ovog simptoma, za krompir je karakteristična i bolest opisana kao „crna noga” i uvenuće celih biljaka. U regionu Bačke (Vojvodina) je tokom maja 2018. godine na merkantilnom usevu krompira (sorta Lady Claire) zapa žena pojava crne noge krompira sa intenzitetom zaraze 5-10%. Već tokom juna intenzitet zaraze se povećao i iznosio je 40-45%. Početni simptomi bolesti su se ispoljavali u vidu uvelosti celih biljaka, dok se vršno lišće uvijalo prema licu i nekrotiralo po rubovima. Kako je bolest napredovala potpunim sušenjem vršnih listova i postepenim sušenjem donjeg lišća, na stablu je pri osnovi boja prelazila u mrku do crnu, a prilikom uzdužnog preseka mogla se uočiti nekroza unutrašnjeg sprovodnog tkiva. S obzirom na veoma izražen intenzitet zaraze, kao i veliki broj mogućih uzročnika koji izazivaju sličan tip oboljenja, cilj ovog istraživanja bio je detekcija i identifikacija prouzrokovača uvelosti i crne noge krompira. Izolacija patogena je vršena na hranljive podloge NA (hranljivi agar) i KDA (krompir-dekstrozni agar), iz biljnih delova (cima) dobijenih sa margina obolelog tkiva, potopljenih i maceriranih u sterilnom fosfatnom puferu, u trajanju od 30 min. Nakon 48 sati, na podlogama su se razvile okrugle i glatke, ispupčene, kremasto-prozirne bakterijske kolonije. Odabrani izolati su gram-negativni, nefluorescentni, fakultativno-anaerobni, oksidaza negativni, katalaza pozitivni. Pek tolitički test je izveden na kriškama krompira (25°C tokom 48 sati), na kojima je već nakon 24 časa dolazilo do propadanja tkiva uz prisustvo karakterističnog mirisa koji prati vlažnu trulež. Prema dobijenim rezultatima, izolati su pokazali pripadnost rodu Pectobacterium. Detaljnija identifikacija izolata vršena je sekvencioniranjem dva konzervativna gena, gapA i mdh, primenom PCR metode sa parom prajmera gapA326F/gapA845R i mdh2/mdh4, tim redom. BLAST analiza je pokazala da svi izolati pokazuju 100% (gapA) i 98% (mdh) homologiju sa Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliensis sojevima deponovanim u NCBI bazi. Rezultati ovog rada ukazuju na postojanje nove podvrste bakterije Pectobacterium carotovorum u Srbiji, koja ranije, ukoliko je i bila prisutna, usled nedostatka filogenetskih informacija do sada nije bila identifikovana i opisana.